不同的离心方法的选择

离心方法通常有以下几种：

一、密度梯度离心法

密度梯度离心又叫作速率—区带离心,沉降系数较接近的物质分离的方法；

其原理是不同颗粒之间存在沉降系数差时，在一定离心力作用下，颗粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同区域上形成区带的方法，介质梯度应预先形成，介质的最大密度要比所有样品颗粒的密度小，常用的有甘油、蔗糖；密度梯度液的制备用梯度混合器，形成由管口至管底逐渐升高的密度梯度；

密度梯度离心法的操作：在离心前把样品轻轻放置在密度梯度溶液表面，离心形成区带。离心后大小不同、形状不同、有一定沉降系数差异的颗粒在密度梯度液中形成若干条界面清楚的不连续区带；此方法适用于分离核酸、蛋白质、核糖体亚基及其它成分。

二、差速离心法

差速离心采用不同离心速度和时间，使不同沉降速度的颗粒分批进行分离；差速离心法的原理是采用逐渐增加离心速度或低速和高速交替进行离心，使沉降速度不同的颗粒在不同的分离速度及不同的离心时间下分批进行分离的方法，叫作差速离心法。当以一定离心力在一定的离心时间内进行离心时，离心管底部就会取得最大和最重颗粒的沉淀，分出的上清液在加上转速下再进行离心，又取得第二部分较大、较重颗粒的“沉淀”及含小和轻颗粒“上清液”，如此进行多次离心处理，可以将液体中的不同颗粒比较好的分开。此时所得沉淀是不纯的，需经过再悬浮和再离心二至三次，才能取得较纯的颗粒。此方法适用于从组织匀浆中分离细胞和病毒。

三、等密度离心法

等密度离心法原理是在不同颗粒存在浮力密度差时，在离心力场下，在密度梯度介质中，颗粒向下或向下沉降，一直移动到与它们各自的密度刚好相同的位置上形成区带，因而使不同浮力密度的物质得到分离；

区别:离心介质、密度梯度范围与密度梯度离心不同，待分离的颗粒密度处在离心介质密度范围内。介质有：氯化铯、溴化铯、硫酸铯、三碘苯衍生物等。操作方法：把介质溶液和样品液均匀混合，用足够时间进行离心处理。介质梯度不需要提前制备，离心时把密度均一的介质液和样品混合后装入离心管，通过离心形成梯度，让颗粒在梯度中进行再分配。此方法适用于分离提取核酸、亚细胞器及质粒。

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